最早出现的是1964年开发的基于细胞的培养测定法 。目前，国内外应用比较广泛的是高效液相色谱法(HPLC) 、高效液相质谱联用法(LC- MS/MS) 和免疫分析法 。
色谱法已广泛应用于全血5-FU血药浓度的测定。虽然HPLC法准确性高 、灵敏度高 、精密度好，但样品处理复杂，回收率低 ，检测时间长 ，给大量样本快速检测带来一定困难 。
高效液相质谱联用法选用质谱检测器 ，可利用任一质荷比或多个质荷比的离子信号进行物质的浓度检测 ，具有血量少 ，样品处理过程简单 ，节省溶剂用量及检测时间短等优点 。同时，高效液相和质谱联用后，分辨性能高 ，灵敏度高，分析速度快，是一种高特异性的检测方法。但存在仪器价格昂贵 ，操作人员专业技术要求高 ，不易普及等缺点 。
化学发光免疫分析法具有灵敏度高 、宽的线性动力学范围、光信号持续时间长、分析方法简便快速结果稳定、误差小 、安全性好及使用期长 、样本需求量少 、样本预处理简单和适用于全自动分析仪等优点 ，与其他方法比较优势 ，更好的促进 5-FU 血药浓度监测在临床中的开展。